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       木瓜為薔薇科木瓜屬植物，用途廣泛，集觀賞、食用、藥用于一體。木瓜在我國分布廣泛，醫(yī)學(xué)名著《本草綱目》《本草遺拾》等對(duì)木瓜的舒筋活絡(luò)、解渴生津、平肝和胃、去風(fēng)濕、治霍亂等功效都有詳盡的記載。木瓜具有抗肝炎作用，用于治療腰椎增生性關(guān)節(jié)炎、前列腺增生、術(shù)后疼痛及痹證等癥狀。近年來的研究表明，木瓜果實(shí)中除含有氨基酸、維生素、果膠、有機(jī)酸、礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)外，還含有具有生物活性的黃酮類物質(zhì)。

　　有文獻(xiàn)報(bào)道木瓜中總黃酮的提取方法采用乙醇提取，但是，這種方法的提取效率仍然較低。近年來，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動(dòng)物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報(bào)道，表明其具有耗能低、效率高、不破壞有效成分的特點(diǎn)。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進(jìn)入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時(shí)間，并且還可避免高溫對(duì)提取成分的影響。但超聲技術(shù)應(yīng)用于提取木瓜葉中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報(bào)道，本文報(bào)道用超聲波提取木瓜葉總黃酮及鑒別。

1　儀器與試劑

1.1　儀器　JP600G型超聲波提取罐（武漢嘉鵬電子有限公司）；UV-755B紫外可見分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）； ZF-Ⅰ型三用紫外分析儀（上海顧村光電儀器廠）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。

1.2　試劑　95%乙醇AR; 60%乙醇AR；亞硝酸鈉AR;硝酸鋁 AR；氫氧化鈉AR;正丁醇AR；三氯化鋁AR;鹽酸AR;氨水AR;鎂粉AR;乙酸鎂AR;冰醋酸AR;乙酸乙酷AR;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）；新鮮木瓜葉采自右江民族醫(yī)學(xué)院校園內(nèi)。

2　方法與結(jié)果

2.1　總黃酮成分提取　取新鮮木瓜葉，烘干，粉碎。稱取木瓜葉粉末約6g，加80 ml95 %乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣再加80 ml95％乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩5～7 ml為止，放置100ml容量瓶中，用 60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。

2.2　測(cè)定方法依據(jù)　以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定木瓜葉中總黃酮的含量，加人鋁離子試劑，同時(shí)控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。

2.3　定量實(shí)驗(yàn)-總黃用的含量測(cè)定

2.3.1　波長的選擇　取樣品液適量，在0.30 ml5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420 700 nm波長范圍測(cè)定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510 nm波長處好的吸收，故測(cè)定時(shí)選用此波長。

2.3.2　標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制　分別精密吸取蘆丁對(duì)照液（0.10 mg/ ml)0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00 ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30 ml,搖勻，靜置6 min;再加 10%硝酸鋁溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min;再加4%氫氧化鈉溶液4.00 ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min，以試劑作空白參比液，于510 nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果見表1。

表1　紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定蘆丁對(duì)照液吸光度

————————————

C/mg·ml-1　 吸光度

————————————

0.00　 0.000

0.005　 0.038

0.01　 0.076

0.02　 0.159

0.03　 0.245

0.04　 0.330

0.05　 0.415

————————————

根據(jù)上表得回歸方程：A＝-6.967 1×10-3＋8.418 1C,r =0.999 9

2.3.3　提取物含量的測(cè)定　精密吸取樣品液0.50 ml,置10.00 ml 容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法測(cè)定其吸光度A＝0.409，根據(jù)回歸方程：A＝-6.967 1×10-3+8.418 1C，計(jì)算樣品中總黃酮的含量C=0.988 0 mg/ml。

2.3.4　回收實(shí)驗(yàn)　精密量取樣品液1.00 ml，加入標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對(duì)照品 1.00 ml(0.10 mg/ml），同前樣品測(cè)定方法操作測(cè)定吸光度，求出回收率為97.79%。

2.4　定性實(shí)臉-總黃酮的鑒別

2.4.1　顏色反應(yīng)　紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)。

濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖?.5 min，立即在紫外光下觀察，呈很明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。

三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點(diǎn)。

乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點(diǎn)。

鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。

2.4.2　紙層析　取樣品溶液10μl點(diǎn)在濾紙上。用正丁醇，醋酸 :水=4:1:5（體積比）為展開劑，上行展開5 h,取出晾干。噴 1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點(diǎn)。

3　討論

3.1　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法工藝簡單，回收率為97.79%，利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高。超聲波可以強(qiáng)化乙醇浸提法，達(dá)到省時(shí)、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。

3.2　黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自然界中很常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色昔及新黃酮類等。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進(jìn)入脂肪組織，進(jìn)而體現(xiàn)出如下功能:消除疲勞、保護(hù)血管、防動(dòng)脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細(xì)胞的功能。

　　黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點(diǎn)倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目，木瓜葉分布廣泛，本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，木瓜葉中含有較為豐富的黃酮。因此，木瓜葉具有廣泛開發(fā)和利用價(jià)值，值得綜合利用加強(qiáng)資源開發(fā)。 （時(shí)珍國醫(yī)國藥第17卷第10期）

　　產(chǎn)品型號(hào)：JP600G型超聲波提取/乳化機(jī)組

　　機(jī)型結(jié)構(gòu)：超聲波發(fā)生器與提取罐分體式

　　超聲頻率：28KHz

　　超聲峰值功率：1000W （由原600W升級(jí)至1000W，價(jià)格不變）

　　提取罐內(nèi)尺寸：直徑320 ×高250mm

　　提取罐容積：小于等于20L

　　攪拌電機(jī)功率：15W

　　攪拌電機(jī)轉(zhuǎn)速：10-30轉(zhuǎn)/min（可調(diào)）

　　電加熱功率：2KW

　　供電電源：220VAC 50HZ 

　　具有數(shù)顯時(shí)鐘可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯功率可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯掃頻可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯溫度可調(diào)功能

　　武漢嘉鵬電子有限公司專業(yè)致力于超聲波提取/萃取、超聲波乳化、超聲波清洗、超聲波污水處理、超聲波酒類醇化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)及銷售。公司擁有技術(shù)。其中“數(shù)字式大功率多用途超聲波電源系統(tǒng)”獲武漢市重大科技成果獎(jiǎng)。數(shù)字掃頻實(shí)現(xiàn)了用戶迫切需要的變頻要求的同時(shí)還彌補(bǔ)了早期雙頻或多頻技術(shù)帶來的超聲轉(zhuǎn)換效率很低的弊端。此項(xiàng)技術(shù)經(jīng)由全國各大院校的用戶使用后反應(yīng)很好。應(yīng)用于植物提取、乳化、污水處理等領(lǐng)域，院校包括：清華大學(xué)、北京大學(xué)、浙江大學(xué)、華中科技大學(xué)、武漢大學(xué)、華中師大、中國地質(zhì)大學(xué)、武漢科技大學(xué)、上海交大、浙江工業(yè)大學(xué)、蘭州大學(xué)、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)、武漢化工學(xué)院、吉林大學(xué)、四川大學(xué)、華南理工大學(xué)、華東理工大學(xué)、江漢大學(xué)、長江大學(xué)、中科院武漢植物所、昆明植物所、中科院過程所、中科院武漢物理所、武漢市藥檢所等。公司產(chǎn)品行銷全國除港、澳、臺(tái)外的所有省份及直轄市。售后方面：公司產(chǎn)品使用自主技術(shù)故性能穩(wěn)定、質(zhì)量很好。公司承諾5年內(nèi)免費(fèi)質(zhì)保。用戶采用超聲波需注意的事項(xiàng)：超聲波提取方面：一、被提取物需粉碎到20目或更細(xì)。粉碎越細(xì)得率越高。二、選用合適的提取溶劑。三、根據(jù)產(chǎn)品的特性和產(chǎn)量合理的安排提取工藝。

　　超聲波乳化方面：一、乳化液的配方包括乳化劑的用量。二、乳化時(shí)間的選定，并不是時(shí)間長就越好，乳化過程是分散和聚合不停的循環(huán)的過程。按現(xiàn)有試驗(yàn)結(jié)果顯示10－15分鐘的乳化粒徑可達(dá)100納米。

　　重要的是數(shù)字掃頻的選擇，此項(xiàng)共有16檔選擇，數(shù)值越低則氣泡越粗、力量越大；數(shù)值越高則氣泡越細(xì)、力量越小。不同的提取或乳化物質(zhì)改變數(shù)字掃頻會(huì)帶來不同的效果及效率。

　　超聲波提取天然產(chǎn)物包括超聲波提取多肽、氨基酸、核酸、各種酶類、單糖、寡糖、多糖、糖蛋白、樹脂、膠體物、木質(zhì)素、維生素、脂肪、油脂、蠟、生物堿、揮發(fā)油、黃酮、糖苷類、苯丙素類、有機(jī)酸、酚類、醌類、甾體化合物、抗生素類等。