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　    斑蝥是我國(guó)中藥中很早被發(fā)現(xiàn)有抗癌作用的藥物，其活性成分為斑蝥素，它對(duì)多種癌細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制和破壞作用。有人用低濃度氫氧化鈉溶液煎煮處理提取斑蝥素獲得成功，亦可用超聲波提取斑蝥素。本實(shí)驗(yàn)確定了超聲波提取斑蝥素的好的工藝，現(xiàn)報(bào)道如下。

　　1 材料

　　JP600G型超聲波提取罐(武漢嘉鵬電子有限公司);島津GC-14B,C-R7A氣相色譜儀(日本島津公司)。斑蝥(經(jīng)廣州中藥大學(xué)鑒定為南方大斑蝥);斑蝥素(廣東省藥檢所);氫氧化鈉、丙酮為分析純;其余均為色譜純。

　　2 方法

　　2.1 含量測(cè)定

　　2.1.1 色譜條件 CBP-1(25cm×0.25mm, 5μm)色譜柱，氫火焰離子化檢測(cè)器，氮?dú)?20 mL· min-1，130 KPa)，氫氣(65 KPa)，AIR(65 KPa)，柱溫：170℃，進(jìn)樣口溫度：210℃，檢測(cè)器溫度：250℃。

　　2.1.2 對(duì)照品溶液配制 精密稱取斑蝥素對(duì)照品 6mg于5mL量瓶中加丙酮至刻度，得濃度為1.2g· L-1的對(duì)照品溶液。

　　2.1.3 供試品溶液制備 精密吸取斑蝥素提取液 10mL,鹽酸調(diào)至PH2，氯仿萃取3次(20，15，15mL) 合并氯仿液，水浴蒸干，殘?jiān)芙?，轉(zhuǎn)移至1mL量瓶，加丙酮至刻度，即得。

　　2.1.4 含量測(cè)定 取對(duì)照品溶液0.8μL,供試液 2μL,進(jìn)行氣相色譜分析，外標(biāo)法計(jì)算含量(斑蝥素保留時(shí)間約5.85min)。

　　2.2　超聲波提取工藝　以斑蝥素含量為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)法，選擇L4(32)正交試驗(yàn)表，考察氫氧化鈉濃度、超聲波功率、超聲時(shí)間對(duì)斑蝥素含量的影響，優(yōu)選好的提取工藝。因素與水平見(jiàn)表1，正交設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。提取操作為：稱取斑蝥2g,加入10倍量125mmol· L-1氫氧化鈉溶液，按正交試驗(yàn)表中條件提取，提取液濾過(guò)，合并濾液，以3000r·min-1離心10min,上清液水浴濃縮至 20mL。照含量測(cè)定方法測(cè)定含量，以含量高者為滿分10分，余按下式計(jì)算：本次試驗(yàn)得分=本次試驗(yàn)含量÷最高含量×10。表1　試驗(yàn)因素水平表 Tab 1 Level of experimental factors

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　　因素

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　　水平 氫氧化鈉濃度/mmol·-1 超聲功率 超聲時(shí)間/min-1

　　A B C

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　　1 0.250 800 25,15

　　2 0.125 600 35,15

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　　表2 正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)表 Tab 2 Data of orthogonal experiment

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　　因素考察指標(biāo)

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　　試驗(yàn)號(hào) 氫氧化鈉濃度 超聲功率 超聲時(shí)間 斑蝥素含量

　　A B C /mg·g-1 得分

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　　1 1 1 1 0.084 1.7

　　2 2 1 2 0.044 0.9

　　3 1 2 2 0.175 3.6

　　4 2 2 1 0.486 10

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　　I1 5.3 2.6 11.7

　　I2 10.9 13.6 4.5

　　I1 2.7 1.3 5.8

　　I2 5.5 6.8 2.3

　　R 2.8 5.5 2.5

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　　2.3　工藝驗(yàn)證　按2.2所得好的工藝提取3批次斑蝥，分別測(cè)定含量。另取同批次斑蝥2g,在10倍量 125mmol·L-1氫氧化鈉溶液中浸泡30min，加熱至 100℃提取60min,濾過(guò)，殘?jiān)儆猛ㄌ崛?0min,濾過(guò)，合并濾液，以3000r·min-1離心10min，上清液水浴濃縮至20mL,共做3份，照含量測(cè)定方法測(cè)定含量。比較兩種方法所得斑蝥素得率煎煮法為1.14, 1.04,1.08，平均為1.09;超聲法為1.16，1.04，1.10平均為1.10，P>0.05。

　　3 結(jié)果

　　由表2R值可知RB>RA≈RC，影響因素大小順序?yàn)锽>A≈C，功率是影響斑蝥素含量的重要因素。因IA2>IA1，IB2>IB1>， IC1>IC2，確定好的工藝為A2B2C1，即用125mmol·L-1氫氧化鈉，功率 600kHz超聲提取2次(25，15min)。該40min超聲提取工藝與120min煎煮效果相當(dāng)。

　　4　討論

　　煎煮法所需時(shí)間長(zhǎng)，加之斑蝥體內(nèi)脂肪等有機(jī)物在氫氧化鈉作用下，加熱后產(chǎn)生強(qiáng)烈惡臭，煎煮液十分粘稠，濾過(guò)困難。用超聲代替煎煮提取斑蝥素克服了上述不足。

　　超聲波輻射可以導(dǎo)致生物體系發(fā)生各種生物效應(yīng)，其物理機(jī)制包括3個(gè)方面：熱學(xué)機(jī)制、力學(xué)(機(jī)械)機(jī)制和空化機(jī)制，空化機(jī)制包括穩(wěn)態(tài)空化和瞬態(tài)空化兩個(gè)方面。一般認(rèn)為，在藥物提取過(guò)程中起主要作用的是空化機(jī)制。功率較低時(shí)容易穩(wěn)態(tài)空化，液體中氣泡并不破裂，而是進(jìn)入體共振(脈動(dòng))狀態(tài)，在其周?chē)a(chǎn)生微聲流，微聲流的粘滯應(yīng)力及氣泡高頻脈動(dòng)本身產(chǎn)生的剪切力會(huì)破壞細(xì)胞。進(jìn)一步提高聲強(qiáng)時(shí)，則發(fā)生瞬態(tài)空化，氣泡在負(fù)壓相迅速膨脹，隨即又在正壓相急速收縮以至崩潰，其瞬時(shí)溫度可達(dá)數(shù)千度，并常伴有發(fā)光，沖擊波及高速射流等現(xiàn)象，藥材細(xì)胞會(huì)被破壞。因此，理論上，功率的提高及超聲時(shí)間的延長(zhǎng)對(duì)藥材細(xì)胞破壞有利(從而有效成分溶出更充分)，但雜質(zhì)的溶出亦大大增加，不利于后續(xù)處理，甚至有可能誘發(fā)化學(xué)反應(yīng)，降低有效成分的得率，本實(shí)驗(yàn)所得好的工藝中，亦印證了這一點(diǎn)。 (中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志第25卷第3期)

　　產(chǎn)品型號(hào)：JP600G型超聲波提取/乳化機(jī)組

　　機(jī)型結(jié)構(gòu)：超聲波發(fā)生器與提取罐分體式

　　超聲頻率：28KHz

　　超聲峰值功率：1000W (由原600W升級(jí)至1000W，價(jià)格不變)

　　提取罐內(nèi)尺寸：直徑320 ×高250mm

　　提取罐容積：小于等于20L

　　攪拌電機(jī)功率：15W

　　攪拌電機(jī)轉(zhuǎn)速：10-30轉(zhuǎn)/min(可調(diào))

　　電加熱功率：2KW

　　供電電源：220VAC 50HZ

　　具有數(shù)顯時(shí)鐘可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯功率可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯掃頻可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯溫度可調(diào)功能

　　武漢嘉鵬電子有限公司專(zhuān)業(yè)致力于超聲波提取/萃取、超聲波乳化、超聲波清洗、超聲波污水處理、超聲波酒類(lèi)醇化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)及銷(xiāo)售。公司擁有多項(xiàng)技術(shù)。其中“數(shù)字式大功率多用途超聲波電源系統(tǒng)”獲武漢市重大科技成果獎(jiǎng)。數(shù)字掃頻實(shí)現(xiàn)了用戶迫切需要的變頻要求的同時(shí)還彌補(bǔ)了早期雙頻或多頻技術(shù)帶來(lái)的超聲轉(zhuǎn)換效率很低的弊端。此項(xiàng)技術(shù)經(jīng)由全國(guó)各大院校的用戶使用后反應(yīng)很好。應(yīng)用于植物提取、乳化、污水處理等領(lǐng)域，院校包括：清華大學(xué)、北京大學(xué)、浙江大學(xué)、華中科技大學(xué)、武漢大學(xué)、華中師大、中國(guó)地質(zhì)大學(xué)、武漢科技大學(xué)、上海交大、浙江工業(yè)大學(xué)、蘭州大學(xué)、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)、武漢化工學(xué)院、吉林大學(xué)、四川大學(xué)、華南理工大學(xué)、華東理工大學(xué)、江漢大學(xué)、長(zhǎng)江大學(xué)、中科院武漢植物所、昆明植物所、中科院過(guò)程所、中科院武漢物理所、武漢市藥檢所等。公司產(chǎn)品行銷(xiāo)全國(guó)除港、澳、臺(tái)外的所有省份及直轄市。售后方面：公司產(chǎn)品使用自主技術(shù)故性能穩(wěn)定、質(zhì)量很好。公司承諾5年內(nèi)免費(fèi)質(zhì)保。用戶采用超聲波需注意的事項(xiàng)：超聲波提取方面：一、被提取物需粉碎到20目或更細(xì)。粉碎越細(xì)得率越高。二、選用合適的提取溶劑。三、根據(jù)產(chǎn)品的特性和產(chǎn)量合理的安排提取工藝。

　　超聲波乳化方面：一、乳化液的配方包括乳化劑的用量。二、乳化時(shí)間的選定，并不是時(shí)間長(zhǎng)就越好，乳化過(guò)程是分散和聚合不停的循環(huán)的過(guò)程。按現(xiàn)有試驗(yàn)結(jié)果顯示10-15分鐘的乳化粒徑可達(dá)100納米。

　　重要的是數(shù)字掃頻的選擇，此項(xiàng)共有16檔選擇，數(shù)值越低則氣泡越粗、力量越大;數(shù)值越高則氣泡越細(xì)、力量越小。不同的提取或乳化物質(zhì)改變數(shù)字掃頻會(huì)帶來(lái)不同的效果及效率。

　　超聲波提取天然產(chǎn)物包括超聲波提取多肽、氨基酸、核酸、各種酶類(lèi)、單糖、寡糖、多糖、糖蛋白、樹(shù)脂、膠體物、木質(zhì)素、維生素、脂肪、油脂、蠟、生物堿、揮發(fā)油、黃酮、糖苷類(lèi)、苯丙素類(lèi)、有機(jī)酸、酚類(lèi)、醌類(lèi)、甾體化合物、抗生素類(lèi)等。