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　　摘 要：研究了Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制劑(KSTI)和Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制劑(BBTI)經(jīng)超聲波處理后的活性、巰基含量、遠(yuǎn)紫外圓二色譜的變化。發(fā)現(xiàn)KSTI和BBTI的單一吸收負(fù)峰在200nm波長(zhǎng)處，KSTI的[θ]200nm=-2545deg·cm2·d/mol，, 其二級(jí)結(jié)構(gòu)由22.5%β折疊，16.25%β轉(zhuǎn)角和61.4%無(wú)規(guī)卷曲組成;BBTI的[θ]200nm= -797deg·cm2·d/mol，由52.6%β折疊和47.4%無(wú)規(guī)卷曲組成。用65%振幅的超聲波場(chǎng)處理11 min 后，KSTI 的[θ]200nm值變?yōu)?1827deg·cm2·d/mol，處理20min后，其β轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)卷曲的含量分別下降至10.8%和54%，而β折疊的含量則增加至35.2%，同時(shí)有約71.5%的二硫化鍵轉(zhuǎn)變成巰基，對(duì)胰蛋白酶的抑制活性則被鈍化55%;而BBTI的二級(jí)結(jié)構(gòu)則表現(xiàn)穩(wěn)定，65%振幅的超聲波場(chǎng)處理20min后，[θ]200nm值只改變?yōu)?700 deg·cm2·d/mol，其β折疊、無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)以及對(duì)胰蛋白酶的抑制活性基本上不受影響，僅有5.29%的二硫鍵轉(zhuǎn)化成巰基。超聲波可能是通過(guò)影響KSTI的二硫鍵，使其二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而影響其活性。

　　關(guān)鍵詞：大豆胰蛋白酶抑制劑;超聲波;圓二色譜 二級(jí)結(jié)構(gòu)

　　大豆胰蛋白酶抑制劑是一類小分子量的蛋白質(zhì)或多肽，對(duì)胰蛋白酶活性有抑制作用，攝入過(guò)量可導(dǎo)致人和動(dòng)物患病。如老鼠胰腺腫大和增生，小雞生長(zhǎng)停止 [1,2]。因此胰蛋白酶抑制劑被認(rèn)為是大豆食品和飼料中主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子。加熱通常是有效地鈍化胰蛋白酶抑制劑的一種物理方法[3]。而用化學(xué)方法鈍化胰蛋白酶抑制劑則包括修飾、還原、去除或封閉胰蛋白酶抑制劑分子中某些活性基團(tuán)[4～7]。近期的研究還提示茶葉中的多酚類也能夠有效地鈍化大豆胰蛋白酶抑制劑[8，9]。

　　Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制劑(KSTI)和Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制劑(BBTI)是大豆中兩種具有不同結(jié)構(gòu)和特性的胰蛋白酶抑制劑，其中KSTI包括數(shù)種功能高度相似的異構(gòu)體[10]。KSTI和BBTI由于分子結(jié)構(gòu)上的差異，對(duì)物理和化學(xué)致鈍作用的抗性差別很大，BBTI除了對(duì)胰蛋白酶有較強(qiáng)的抑制活性外，對(duì)于熱、酸的鈍化和胃蛋白酶的水解作用都具有很強(qiáng)的抗性。超聲波場(chǎng)能夠通過(guò)影響生物大分子的結(jié)構(gòu)而能顯著地改變其功能，包括生物活性[11，12]。然而關(guān)于超聲波對(duì)大豆胰蛋白酶抑制劑結(jié)構(gòu)及活性影響的研究報(bào)道目前還較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)用超聲波場(chǎng)對(duì)KSTI和BBTI進(jìn)行處理，研究其活性與結(jié)構(gòu)的變化，以揭示其活性、抗鈍化能力的差異與其結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系。

　　產(chǎn)品型號(hào)：JP600G型超聲波提取/乳化機(jī)組

　　機(jī)型結(jié)構(gòu)：超聲波發(fā)生器與提取罐分體式

　　超聲頻率：28KHz

　　超聲峰值功率：1000W (由原600W升級(jí)至1000W，價(jià)格不變)

　　提取罐內(nèi)尺寸：直徑320 ×高250mm

　　提取罐容積：小于等于20L

　　攪拌電機(jī)功率：15W

　　攪拌電機(jī)轉(zhuǎn)速：10-30轉(zhuǎn)/min(可調(diào))

　　電加熱功率：2KW

　　供電電源：220VAC 50HZ

　　具有數(shù)顯時(shí)鐘可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯功率可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯掃頻可調(diào)功能

　　具有數(shù)顯溫度可調(diào)功能

　　武漢嘉鵬電子有限公司專業(yè)致力于超聲波提取/萃取、超聲波乳化、超聲波清洗、超聲波污水處理、超聲波酒類醇化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)及銷售。公司擁有多項(xiàng)技術(shù)。其中“數(shù)字式大功率多用途超聲波電源系統(tǒng)”獲武漢市重大科技成果獎(jiǎng)。數(shù)字掃頻實(shí)現(xiàn)了用戶迫切需要的變頻要求的同時(shí)還彌補(bǔ)了早期雙頻或多頻技術(shù)帶來(lái)的超聲轉(zhuǎn)換效率很低的弊端。此項(xiàng)技術(shù)經(jīng)由全國(guó)各大院校的用戶使用后反應(yīng)很好。應(yīng)用于植物提取、乳化、污水處理等領(lǐng)域，院校包括：清華大學(xué)、北京大學(xué)、浙江大學(xué)、華中科技大學(xué)、武漢大學(xué)、華中師大、中國(guó)地質(zhì)大學(xué)、武漢科技大學(xué)、上海交大、浙江工業(yè)大學(xué)、蘭州大學(xué)、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)、武漢化工學(xué)院、吉林大學(xué)、四川大學(xué)、華南理工大學(xué)、華東理工大學(xué)、江漢大學(xué)、長(zhǎng)江大學(xué)、中科院武漢植物所、昆明植物所、中科院過(guò)程所、中科院武漢物理所、武漢市藥檢所等。公司產(chǎn)品行銷全國(guó)除港、澳、臺(tái)外的所有省份及直轄市。售后方面：公司產(chǎn)品使用自主技術(shù)故性能穩(wěn)定、質(zhì)量很好。公司承諾5年內(nèi)免費(fèi)質(zhì)保。用戶采用超聲波需注意的事項(xiàng)：超聲波提取方面：一、被提取物需粉碎到20目或更細(xì)。粉碎越細(xì)得率越高。二、選用合適的提取溶劑。三、根據(jù)產(chǎn)品的特性和產(chǎn)量合理的安排提取工藝。

　　超聲波乳化方面：一、乳化液的配方包括乳化劑的用量。二、乳化時(shí)間的選定，并不是時(shí)間長(zhǎng)就越好，乳化過(guò)程是分散和聚合不停的循環(huán)的過(guò)程。按現(xiàn)有試驗(yàn)結(jié)果顯示10-15分鐘的乳化粒徑可達(dá)100納米。

　　重要的是數(shù)字掃頻的選擇，此項(xiàng)共有16檔選擇，數(shù)值越低則氣泡越粗、力量越大;數(shù)值越高則氣泡越細(xì)、力量越小。不同的提取或乳化物質(zhì)改變數(shù)字掃頻會(huì)帶來(lái)不同的效果及效率。

　　超聲波提取天然產(chǎn)物包括超聲波提取多肽、氨基酸、核酸、各種酶類、單糖、寡糖、多糖、糖蛋白、樹脂、膠體物、木質(zhì)素、維生素、脂肪、油脂、蠟、生物堿、揮發(fā)油、黃酮、糖苷類、苯丙素類、有機(jī)酸、酚類、醌類、甾體化合物、抗生素類等。